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中华乳腺病杂志(电子版)

中华乳腺病杂志(电子版) ›› 2015, Vol. 09 ›› Issue (02) : 106 -110. doi: 10.3877/cma. j. issn.1674-0807.2015.02.007

论著

埃兹蛋白对人乳腺癌细胞MDA-MB-231 侵袭转移能力影响的初步实验研究
何菁1, 夏添松1, 王水1,†()   
  1. 1.210036 南京,江苏省南京医科大学第一附属医院乳腺病科
  • 收稿日期:2014-12-24 出版日期:2015-04-01
  • 通信作者: 王水

Effects of ezrin expression on invasion and metastasis of human breast cancer MDA-MB-231 cells

Jing He1, Tiansong Xia1, Shui Wang1,†()   

  1. 1.Breast Disease Center, the First Affiliated Hospital, Nanjing Medical University, Nanjing 210036,China
  • Received:2014-12-24 Published:2015-04-01
  • Corresponding author: Shui Wang
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引用本文：

何菁, 夏添松, 王水. 埃兹蛋白对人乳腺癌细胞MDA-MB-231 侵袭转移能力影响的初步实验研究[J/OL]. 中华乳腺病杂志(电子版), 2015, 09(02): 106-110.

Jing He, Tiansong Xia, Shui Wang. Effects of ezrin expression on invasion and metastasis of human breast cancer MDA-MB-231 cells[J/OL]. Chinese Journal of Breast Disease(Electronic Edition), 2015, 09(02): 106-110.

目的

探讨人乳腺癌细胞MDA-MB-231 中埃兹蛋白(ezrin)稳定下调后,是否通过MMP-9、Src/β-catenin 等途径影响细胞的侵袭转移能力。

方法

慢病毒感染人乳腺癌MDA-MB-231 细胞后,将细胞分为实验组231-sh1,实验组231-sh2 和阴性对照组231-NC,采用Western blot 和免疫荧光法观察ezrin 蛋白的干扰效率,用Transwell 法观察ezrin 表达下调对细胞侵袭转移能力的影响,用Western blot 法观察基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和Src/β-连结蛋白(β-catenin)通路相关蛋白的表达情况。 各组间均数比较采用单因素方差分析和Post hoc 检验(LSD 法)。

结果

慢病毒感染MDA-MB-231 细胞后,Western blot 显示,与阴性对照组231-NC(1.0083±0.0629)相比,实验组231-sh1(0.3833±0.0326)和231-sh2(0.3342±0.0306) 中ezrin 蛋白的表达明显降低(P 均＜0.050)。 免疫荧光实验中获得相同的改变(231-NC:30.103±2.243;231-sh1:17.227±1.801;231-sh2:14.857±0.394;P 均＜0.050)。 迁移实验中,与阴性对照组231-NC(940.67±80.507)相比,实验组231-sh1(459.67±51.549)和231-sh2(402.00±52.460)穿膜细胞数均明显减少(P 均＜0.050)。 侵袭实验中获得类似的改变(231-NC:157.33±9.713;231-sh1:96.00±14.731;231-sh2:73.67±13.503;P 均＜0.050)。 实验组231-sh1 和231-sh2 分别与阴性对照组231-NC 相比,MMP-9、Src、P-Src、β-catenin 和P-β-catenin 表达明显降低(P 均＜0.050)。

结论

ezrin 表达下调可以降低MDA-MB-231 细胞的侵袭转移能力,其可能通过MMP-9 以及Src 和β-catenin 磷酸化的作用机制来影响乳腺癌的侵袭转移能力。

关键词: 乳腺肿瘤, 埃兹蛋白, 侵袭, 转移

Objective

To explore whether the down-regulation of ezrin can affect the invasion and metastasis of human breast cancer MDA-MB-231 cells via MMP-9,Src/β-catenin pathways.

Methods

After the lentivirus were infected into MDA-MB-231 cells, the cells were divided into experimental groups (231-sh1 and 231-sh2) and negative control group (231-NC). The interference efficiency of ezrin was tested by Western blot and immunofluorescence assay. The abilities of migration and invasion were evaluated by Transwell assays after ezrin down-regulation. The expressions of matrix metalloproteinase-9(MMP-9) and the related proteins of Src/β-catenin pathway were also detected by Western blot. The means between groups was compared using oneway variance analysis and Post hoc test (LSD).

Results

Western blot results showed that after lentivirus being infected into MDA-MB-231 cells, the expression of ezrin protein in groups 231-sh1 and 231-sh2 was significantly lower than that in group 231-NC (231-NC:1.0083±0.0629;231-sh1:0.3833±0.0326;231-sh2:0.3342±0.0306;all P＜0.050). The immunofluorescence assay showed the same change(231-NC:30.103±2.243;231-sh1:17.227±1.801;231-sh2:14.857±0.394;all P＜0.050). In migration experiment, the number of cells passing through the Transwell membrance in 231-sh1 and 231-sh2 was significantly lower than that in 231-NC(231-NC:940.67±80.507;231-sh1:459.67±51.549;231-sh2:402.00±52.460, all P ＜0.050). The invasion experiment showed the same change(231-NC:157.33±9.713;231-sh1:96.00±14.731;231-sh2:73.67±13.503, all P＜0.050). Compared with 231-NC, the expressions of MMP-9, Src, P-Src, β-catenin and P-β-catenin in 231-sh1 and 231-sh2 were significantly decreased (all P ＜0.050).

Conclusions

The down-regulation of ezrin expression may inhibit the abilities of migration and invasion in MDA-MB-231 cells via the phosphorylation of MMP-9, src and β-catenin.

Key words: Breast neoplasms, ezrin, Invasion, Metastasis
图1 免疫荧光检测各组乳腺癌细胞MDA-MB-231 中ezrin 蛋白的表达 注:DAPI 染核;ezrin 为埃兹蛋白
图2 Western blot 检测乳腺癌细胞MDA-MB-231 各处理组中ezrin 蛋白的表达 注:ezrin 为埃兹蛋白,GAPDH 为内参蛋白
图3 Transwell 实验检测ezrin 下调对各组乳腺癌细胞MDA-MB-231 迁移、侵袭能力的影响 注:a、b、c 图分别为对照组231-NC、实验组231-sh1 和实验组231-sh2 的迁移实验结果;d、e、f 图分别为对照组231-NC、实验组231-sh1 和实验组231-sh2 的侵袭实验结果
表1 各组乳腺癌细胞MDA-MB-231 中MMP-9、Src、P-Src、β-catenin 和P-β-catenin 蛋白的表达
组别 MMP-9蛋白 Src蛋白 P-Src蛋白 β-catenin蛋白 P-β-catenin蛋白
实验组231-sh1ab 0.6298±0.0993 0.4050±0.1173 0.4733±0.1267 0.5814±0.0779 0.5203±0.0734
实验组231-sh2a 0.6090±0.08081 0.4157±0.0902 0.2667±0.0786 0.5954±0.0402 0.5122±0.0437
对照组231-NC 0.9888±0.0751 0.9866±0.1127 1.0267±0.1485 0.9949±0.0688 1.0130±0.1079
F值 18.615 28.560 31.395 39.942 32.526
P值 0.003 0.001 0.001 0.000 0.001
图4 Weastern blot 检测各组乳腺癌细胞MDA-MB-231 中MMP-9 蛋白、Src 蛋白、P-Src 蛋白、β-catenin 蛋白以及P-β-catenin 蛋白的表达 注:GAPDH 为内参蛋白;MMP-9 为基质金属蛋白酶;P-src 为磷酸化的src 蛋白;β-catenin 为β 连环蛋白;P-β-catenin 为磷酸化的β 连接蛋白
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